背景介绍
免疫检查位点抑制剂（ICIs）是肿瘤治疗领域中里程碑式的治疗策略。在非小细胞肺癌（NSCLC）中，可以单独应用ICIs或者与其他的抗癌药物联用以改善传统化疗的患者生存率。然而ICIs方法受限于患者。因此研究出受益于ICIs治疗的肿瘤患者的生物标记物是当前肿瘤治疗中的一大挑战。在NSCLC中，PD-L1的表达是迄今为止已经明确的生物标记物，但仍有许多限制，如预测生物标记物表达缺陷的患者可能对ICIs也有反应。其他的肿瘤相关的生物标记物(包括肿瘤突变的基因表达谱)仍处于研究中。在肿瘤微环境中宿主相关的生物标记物十分罕见。NSCLC中，特异性免疫细胞亚型对肿瘤微环境的影响与ICI的疗效有关。肿瘤浸润的淋巴细胞（TILs）的形态学评估包括类型、密度、肿瘤组织的定位以及HE染色结果，描述了多种肿瘤类型中的诊断因子。
作者的研究主要确定了用尼武单抗单独治疗和化疗相比，TIL与ICI疗效之间的关系。
主要实验技术
在这个回顾性的研究中，研究了恶性NSCLC的两个治疗方法：免疫治疗（IC）和化疗（CC）（图1）。在IC中，用尼武单抗治疗，而CC则是回顾性的病例整理，需要有存档的肿瘤组织，回顾性收集患者的临床、病理和分子特征。
图1
TIL密度检测
由两位病理学家提出的，用HE染色方法的半定量方法检测治疗前肿瘤组织样本中TIL的密度。已经报道了包含基质TIL的肿瘤面积百分比，且高TIL含量是指在IC的平均值以上10%，临界点是由对数最大化方法确定的。
PD-L1免疫组化实验
用实验室来源的检测方法（克隆28-8或者E1L3N）在确定为样本的患者中检测PD-L1表达情况，并进行校准。然后进行肿瘤细胞染色评分：认为在任何密度下肿瘤细胞的膜染色≥1%即为阳性。
反应性的检测
主要终点是整体生存率(OS)。次要终点为疾病控制率（DCR），无进展生存率（PFS），整体反应率（ORR）。对每一个待调查者进行放射学评估，其评估方法要与每一个研究中心相一致。
PFS是指从治疗开始到疾病进展或者死亡的时间，无论是否为首次出现。OS是指任何病因导致的从治疗开始到死亡的时间。DCR是指完全+部分反应+稳定疾病的时间。而ORR为完全+部分反应的时间，即与DCR的前两者相同。
数据分析
比较高TIL患者与非高TIL患者之间的肿瘤特异性特征。评估TIL与生存终点之间的关系，作者使用了包括肺癌预后因素的多元Cox模型。在模型中辩证变量之间的关系，以解决潜在的共线性问题。计算各个参数值：对于IC来说，可以用单变量逻辑回归模型来评估患者特征与反应性之间的关系。然后进行统计学分析。
主要的实验结果
结果一：免疫治疗
在表1中列举了个患者的基本特征，PD-L1阳性率占48%，阴性率占52%。追踪11个月，平均生存时间为11个月，平均PFS为3.1个月。ORR和DCR分别为22%和57%。间质中平均TIL的表达为10%。在表2中总结了与TIL表达相关的临床特征。在多元分析中，高TIL与OS和PFS无关（表3）。
低TIL患者的平均生存率为8.4个月，而高TIL患者中生存率更低一些。同样，在低和高TIL患者中平均PFS分别为13和2.2个月（图2）。TIL较高与ORR和DCR有关（表4）。在PD-L1阳性的患者中，TIL较高与PD-L1表达无关（图3）。
表1
表2
图2
图3
表3
表4
结果二：化疗
在表1中列举了个患者的基本特征。追踪了75个月，在37%的患者中观察到了高TIL，在表2中总结了与TIL表达相关的临床特征。在多元分析的结果中显示TIL与PFS无关。平均PFS和OS分别为5.7和11.7个月。在高TIL中，平均OS为11.6个月，而在低TIL患者中平均OS为11.8个月。而在高和低TIL患者中的PFS分别为5.3和5.9个月。PD-L1表达情况不可用于该类患者的诊断并且不能评估大多数情况下肿瘤样本的不可用性（图2）。
文献讨论
在该研究中，作者首次报道了在晚期NSCLC中，高TIL密度与免疫治疗疗效之间的关系。然而，在CC中观察到没有差别，这说明了TIL在预测ICI治疗效益的潜在作用。与乳腺癌不同，很少有研究HE染色中TIL密度对于肿瘤诊断的影响。作者的评估是基于间质隔的，因为上皮淋巴细胞的形态学评估的可变性更高，再现性更差。基于此，作者发现在28%的IC和37%的CC中TIL水平较高，这与之前的报道相一致。在大多数关于NSCLC的研究中，常用T细胞的免疫组化实验表现TIL的水平，但没有归档的标准检测方法。对HE染色的切片进行TIL的形态学评估可以为常规应用提供一个直观的检测结果，这是一种与病理实验室类似的淋巴细胞检测方法，并提出了标准化病理评估的策略。在肺癌中，有研究用于评估TILs水平，主要是通过IHC染色。然而，据我们所知，没有研究可以用来评估TILs在NSCLC诊断以及免疫治疗中的价值。早期阶段，在间质中有较多的与疾病特异性生存率有关的CD8+细胞和CD4+细胞，其结果与早期研究一致。在多元分析中，各个阶段肺癌的间质中CD8+高与OS长紧密相关。TIL高与化疗反应无关，这也与作者的结果相一致。
淋巴细胞代表针对癌症特异性抗原的适应性反应中主要的细胞*性种群。TILs代表着对肿瘤细胞的适应性免疫反应的水平的广泛评估，包括一系列有不同功能的亚家族，包括CD8+*性T淋巴细胞、CD4+细胞和CD45RO+记忆T细胞等。作者之前还查到了TIL密度与CD3+、CD8+细胞密度之间的关系，这可以解释TILs与肿瘤细胞对ICIs反应之间的关系。
然而作者的研究有几个限制：有一些样本患者的临床与病理学数据缺失；在大多数患者中PD-L1的病理学状态不能仅仅取决于治疗的时间。联合应用PD-L1和TIL可以改善ICI治疗的疗效。其次，存档肿瘤标本用于接受化疗的大多数IC患者，而近期标本中治疗前TIL的评估可能是一种与临床相关性更强的方法。最后，TIL的形态学评估包括所有的T细胞亚型，对于ICIs的诊断与治疗的作用是相反的。此外，还未探索出其他的调节TIL活性的免疫细胞亚型。尽管如此，作者的研究也表明了高TIL可以作为简单评价ICIs治疗疗效的指标，可以广泛应用，与免疫治疗结果相关性较强。
总之，在恶性NSCLC中，HE切片的组织学评估高TIL密度与免疫治疗（非化疗）的疗效成正相关，TIL的形态学评估是一种简单可行的方法，有待于进一步的验证。
文献来源：本文发表于杂志《EurJCancer》，第一作者为：ItharGataa；通讯作者为：JulienAdam；通讯单位为：CancerMedicineDepartment
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