阅读提示
14Dec
阅读本文大约需要9分钟
导读：
本文献研究背景
本文献研究内容
本文献研究总结
一、研究背景
WNT2是一种经常在多种癌症中升高的蛋白，如胃癌，肺癌，宫颈癌等。他所激活的Wnt信号是肠道发展和体内平衡的关键,而Wnt/?-catenin通路的异常激活是肠道癌形成的一个主要推动力。同时WNT2也是一种促血管生成因子，能够促进肝窦内皮细胞及其他内皮细胞的生成。WNT2在很多肿瘤中表达升高并且参与了肿瘤的进展。在结直肠癌中，癌相关成纤维细胞中的WNT2含量选择性升高，导致侵袭和转移增加。而WNT2在结直肠癌中对于血管生成的作用还没有被阐明。本篇文章讲述了CAF衍生的WNT2对于结直肠癌肿瘤血管生成的作用。
二、研究内容
Result1
测定HUVEC细胞在各个细胞周期的百分率。
A图看到表达WNT2和表达GPF的HUVEC各个细胞周期比率没有改变。B，C图是HUVEC与转染空载对照和敲低WNT2的CAF共培养的比较，发现两者之间也没有明显差异。同时D图单一培养的敲低WNT2及空载对照的CAF之间也没有差异。值得注意的是，与图A相比，共培养后内皮细胞的增殖大大降低，表明CAF诱导了潜在的分化作用。
Result2
使用7TGP荧光素酶标记了Wnt/?-catenin这个信号通路。
A图作者将HUVEC与过表达WNT2和缺乏WNT2的皮肤成纤维细胞共培养，发现过表达WNT2这一组显著激活了HUVEC的Wnt/?-catenin信号通路。图B是将WNT2与WNT信号通路的另外一个强激活剂WNT3A的比较，发现两者具有相同的激活效率。C,D两图是对共培养后的HUVEC做的侵袭和转移的试验，发现与WNT2过表达组共培养的HUVEC侵袭转移显著增强。
Result3
评估基质成纤维细胞衍生的WNT2的血管生成特性。
这种方法法能够量化与体内情况相当的与成纤维细胞紧密接触的内皮细胞的多种血管生成特性，这种情况下内皮细胞会形成带有管腔的小型容器。A图是作者将正常的人类皮肤成纤维细胞过表达WNT2，图B是将HUVEC与两种皮肤成纤维细胞共培养14天之后评估CD31结构，过表达组产生更大的血管结构，C图是做了一个统计进行量化，结果显示过表达组的容器面积，发芽数，分支点和每珠的发芽长度都明显增加。D图作者将CAF敲低WNT2，将CAF及敲低WNT2的CAF与HUVEC共培养，重复上面的试验，发现敲低组产生了相反的作用。通过图3，作者认为证明了结肠癌CAFs中WNT2升高促血管生成功能的假设。
Result4
体内试验。
由于将基质细胞与肿瘤细胞共注射的时候基质细胞会迅速消失，所以作者选择了在肿瘤细胞中过表达WNT2。发现过表达WNT2的肿瘤细胞，肿瘤体积及血管密度均升高。但是图E可以看到小、中、大血管的分布在肿瘤中并没有改变，这表明WNT2的表达对肿瘤血管生成有普遍影响，而对血管成熟没有影响。图F是查找了人类结直肠癌公开数据集，显示WNT2含量与血管内皮标志物V,E-cadherin和血管内皮生长因子受体2的中至强正相关。后面则是WNT2与一些血管标志物与患者生存率的关系，高表达WNT2的患者生存率较低。
Result5
研究了WNT2对于CAF分泌因子的影响，进一步了解导致WNT2介导的血管生成的分子机制。
A图是对两组CAF敲低WNT2前后的上清液进行的高分辨率质谱分析，对分泌的蛋白质进行了全局分析，存在显著差异。B,C是对两组敲低CAF中显著下调的蛋白的统计。这些蛋白质大多数与ECM的组织和分解，细胞粘附，血小板脱颗粒以及细胞生长的调节有关，这与先前对WNT2作用的发现或文献数据相符。在两组均显著降低的44个蛋白中发现有35.6%与促血管生成表现有关，仅有15.6%与抗血管生成功能有关。因此作者认为CAF中WNT2的表达使平衡趋向于更具促血管生成性的表型，还包括ECM重塑的改变，这支持了体外和体内实验中观察到的结果。
Result6
通过高通量分析对于CAF，敲低WNT2的CAF与HUVEC共培养之间一些细胞因子的检测，探讨他们之间的相互影响。
通过qPCR和ELISA试验，检测到四个显示出明显调节作用的WNT2诱导的分泌分子：IL-6，G-CSF，ANG-2（血管生成素2）和PGF（前列腺素F）.图F显示加入重组人IL-6、G-CSF和PGF的加入显著增加了成管实验中血管的形成，血管长度和分支均增加。将这些结果加在一起，再加上基于质谱的分泌组分析，作者认为源自结肠CAF的WNT2通过增加微环境中促血管生成因子的分泌来支持肿瘤血管生成。
三、研究总结
综上所述，我们对CRC中基质衍生的WNT2功能进行了系统的综合分析，发现WNT2在维持活化的CAF表型方面发挥了关键作用，该表型与维持促血管生成分泌体相关。我们的结论是，这与WNT2对EC迁移和侵袭的直接影响相结合，有助于CRC中肿瘤血管生成的提高。
往期精彩
1.癌痛的规范化诊疗
2.目*、身*、可不能轻视
3.Exosome提取(细胞培养液上清)实验
4.医院——普外科(微创)
部分图片、文字来源于Angiogenesis杂志（侵删）
策划/殷佩浩
审校/殷佩浩
责任编辑/何菁
翻译/方凯
更有医学科普，营养指南等，
